Principio
L'elettroforesi su pellicola di acetato di cellulosa è un metodo di elettroforesi che utilizza una pellicola di acetato di cellulosa come supporto.Il fenomeno in cui le particelle cariche si muovono verso l'elettrodo opposto sotto l'azione del campo elettrico è chiamato elettroforesi.Poiché ogni proteina ha un punto isoelettrico specifico, se una proteina viene posta in una soluzione con un pH inferiore al suo punto isoelettrico, la proteina sarà caricata positivamente e si sposterà verso l'elettrodo negativo.Al contrario, si sposta al polo positivo.Poiché la velocità delle molecole proteiche che si muovono in un campo elettrico è correlata alla loro carica, alla forma e alle dimensioni delle molecole, diverse proteine possono essere separate mediante elettroforesi.Il siero contiene una varietà di proteine, tutte con punti isoelettrici a pH 7,5 o meno.Quando il siero viene posto in un tampone a pH 8,6 per eseguire l'elettroforesi, tutte le proteine del siero vengono caricate negativamente e si spostano verso il lato positivo nel campo elettrico.Poiché varie proteine del siero hanno cariche diverse allo stesso pH, le particelle molecolari hanno dimensioni diverse, e quindi la velocità di migrazione è diversa, e vengono separate mediante elettroforesi.I punti isoelettrici e i pesi molecolari delle proteine sieriche sono riportati nella tabella seguente:
| Proteina | Punti isoelettrici (PI) | Peso molecolare |
| Albumina | 4.88 | 69 000 |
| α1-globulina | 5.00 | 200 000 |
| α2-globulina | 5.06 | 300 000 |
| β-globulina | 5.12 | 9 000~150 000 |
| γ-gloulina | 6,85~7,50 | 156 000~ 300 000 |
L'esperimento consiste nel separare diverse proteine nel siero sanguigno utilizzando una membrana di acetato di cellulosa (abbr. CAM) come mezzo di supporto.CAM è una sorta di schiumaefilm con una buona uniforme e lo spessore è 0,1 mm-1,5 mm, che ha un certo assorbimento d'acqua.
Materiali, strumenti e reagenti per l'elettroforesi CAM
Campioni:siero di sangue umano sano
Strumento:alimentatore DYY-6C, serbatoio per elettroforesi DYCP-38C, caricamento campione superiore WD-9404
I reagenti
1) membrana in acetato di cellulosa 7X9cm
2) Soluzione tampone di barbitolo PH 8,6 (forza ionica 0,05-0,09, è 0,06 tid): prendere 1,84 g di acido dietil barbiturico, quindi prendere 1,03 g di dietil sodio pentobarbital, aggiungere un po' di acqua distillata al calore per sciogliere e preparare fino a 1000 ml;
3) Macchia: Ponceau S 0,2 g, tricloroacetico 3 g, aggiungere 100 ml di acqua distillata;
4) TBS/T o PBS/T: 45 ml di etanolo al 95%, 5 ml di acido acetico glaciale, aggiungere 50 ml di acqua distillata;
5) Soluzione detergente: 70 ml di etanolo anidro, 30 ml di acido acetico glaciale.
Metodo dell'esperimentod
1) Preparare la membrana: immergere la membrana nella soluzione tampone di barbitolo per 30 minuti-8 ore ed estrarla, rimuovere la soluzione extra con carta assorbente.
2) Caricamento dei campioni: distinguere il lato ruvido e il lato liscio della membrana e tracciare una linea a 1,5 cm di distanza dall'estremità superiore del lato ruvido.Caricare i campioni mediante uno strumento di caricamento campione superiore sul lato ruvido.Nota: i campioni devono essere caricati sul lato ruvido della membrana.Dopo che i campioni di siero sono completamente penetrati nella membrana, capovolgere la membrana, posizionare il lato ruvido (con i campioni) rivolto verso il basso nel serbatoio e l'estremità con i campioni viene posizionata nell'elettrodo negativo.
3) Elettroforesi: accendere l'alimentazione, 0.4～Membrana da 0,6 m A/cm, il tempo di esecuzione è di 30-45 minuti.Dopo aver eseguito l'elettroforesi, spegnere l'alimentazione.
4) Colorare e pulire: estrarre la membrana dal serbatoio e immergerlait nella soluzione colorante per 5 minuti, quindi pulirlo ripetutamente nella soluzione detergente per 3-4 volte finché il colore di sfondo non diventa chiaro.Le proteine sieriche dovrebbero essere mostrate sulle bande e normalmente ci sono cinque zone, dall'estremità superiore della linea contrassegnata, albumina, α1-gloulina, α2-gloulina, β-gloulina, γ-gloulina.
5) Conservazione: sottoporre a elettroforesi a seccogruppo musicalenella soluzione detergente per 10-15 minuti, quindi estrarlo e incollarlo su un vetro pulito, dopo che si sarà asciugato diventerà una pellicola trasparentegruppo musicale.
SperimentareRisultato
L'effetto di separazione dei campioni di siero è buono e non si verifica alcun fenomeno di "band tailing".La ripetibilità dei risultati varia a seconda delle procedure di test e dei metodi dello sperimentatore e la ripetibilità è elevata.
Conclusione
Il sistema di rilevamento rapido dell'elettroforesi clinica (Serbatoio per elettroforesiDYCP-38C,Alimentazione elettricaDYY-6C e caricamento campione superiore WD-9404) prodotto dal nsazienda Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltdsoddisfa i requisiti sperimentali,Ei risultati sono riproducibili, semplici e veloci, adatti ainsegnamentoricerca.
Pechino LiuyiBiotechnology Co., Ltd è specializzata nella produzione di prodotti di elettroforesi per l'industria delle scienze della vita, cheha più di 50 anni di storia in Cina e l'azienda è in grado di fornire prodotti stabili e di alta qualità in tutto il mondo.Attraverso anni di sviluppo, è degno della tua scelta!
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Orario di pubblicazione: 14 novembre 2022