Principio
L'elettroforesi su pellicola di acetato di cellulosa è un metodo di elettroforesi che utilizza una pellicola di acetato di cellulosa come supporto. Il fenomeno in cui le particelle cariche si muovono verso l'elettrodo opposto sotto l'azione del campo elettrico è chiamato elettroforesi. Poiché ogni proteina ha un punto isoelettrico specifico, se una proteina viene posta in una soluzione con un pH inferiore al suo punto isoelettrico, la proteina sarà caricata positivamente e si sposterà verso l'elettrodo negativo. Al contrario, si sposta al polo positivo. Poiché la velocità delle molecole proteiche che si muovono in un campo elettrico è correlata alla loro carica, alla forma e alle dimensioni delle molecole, diverse proteine possono essere separate mediante elettroforesi. Il siero contiene una varietà di proteine, tutte con punti isoelettrici a pH 7,5 o meno. Quando il siero viene posto in un tampone a pH 8,6 per eseguire l'elettroforesi, tutte le proteine del siero vengono caricate negativamente e si spostano verso il lato positivo nel campo elettrico. Poiché varie proteine del siero hanno cariche diverse allo stesso pH, le particelle molecolari hanno dimensioni diverse, e quindi la velocità di migrazione è diversa, e vengono separate mediante elettroforesi. I punti isoelettrici e i pesi molecolari delle proteine sieriche sono riportati nella tabella seguente:
| Proteina | Punti isoelettrici (PI) | Peso molecolare |
| Albumina | 4.88 | 69 000 |
| α1-globulina | 5.00 | 200 000 |
| α2-globulina | 5.06 | 300 000 |
| β-globulina | 5.12 | 9 000~150 000 |
| γ-gloulina | 6,85~7,50 | 156 000~ 300 000 |
L'esperimento consiste nel separare diverse proteine nel siero sanguigno utilizzando una membrana di acetato di cellulosa (abbr. CAM) come mezzo di supporto. CAM è una sorta di loos schiumatoefilm con una buona uniforme e lo spessore è 0,1 mm-1,5 mm, che ha un certo assorbimento d'acqua.
Materiali, strumenti e reagenti per l'elettroforesi CAM
Campioni:siero di sangue umano sano
Strumento:alimentatore DYY-6C, serbatoio per elettroforesi DYCP-38C, caricamento campione superiore WD-9404
I reagenti
1) membrana in acetato di cellulosa 7X9cm
2) Soluzione tampone di barbitolo PH 8,6 (forza ionica 0,05-0,09, è 0,06 tid): prendere 1,84 g di acido dietil barbiturico, quindi prendere 1,03 g di dietil sodio pentobarbital, aggiungere un po' di acqua distillata al calore per sciogliere e preparare fino a 1000 ml;
3) Macchia: Ponceau S 0,2 g, tricloroacetico 3 g, aggiungere 100 ml di acqua distillata;
4) TBS/T o PBS/T: 45 ml di etanolo al 95%, 5 ml di acido acetico glaciale, aggiungere 50 ml di acqua distillata;
5) Soluzione detergente: 70 ml di etanolo anidro, 30 ml di acido acetico glaciale.
Metodo dell'esperimentod
1) Preparare la membrana: immergere la membrana nella soluzione tampone di barbitolo per 30 minuti-8 ore ed estrarla, rimuovere la soluzione extra con carta assorbente.
2) Caricamento dei campioni: distinguere il lato ruvido e il lato liscio della membrana e tracciare una linea a 1,5 cm di distanza dall'estremità superiore del lato ruvido. Caricare i campioni mediante uno strumento di caricamento campione superiore sul lato ruvido. Nota: i campioni devono essere caricati sul lato ruvido della membrana. Dopo che i campioni di siero sono completamente penetrati nella membrana, capovolgere la membrana, posizionare il lato ruvido (con i campioni) rivolto verso il basso nel serbatoio e l'estremità con i campioni viene posizionata nell'elettrodo negativo.
3) Elettroforesi: accendere l'alimentazione, 0.4～Membrana da 0,6 m A/cm, il tempo di esecuzione è di 30-45 minuti. Dopo aver eseguito l'elettroforesi, spegnere l'alimentazione.
4) Colorare e pulire: estrarre la membrana dal serbatoio e immergerlait nella soluzione colorante per 5 minuti, quindi pulirlo ripetutamente nella soluzione detergente per 3-4 volte finché il colore di sfondo non diventa chiaro. Le proteine sieriche dovrebbero essere mostrate sulle bande e normalmente ci sono cinque zone, dall'estremità superiore della linea contrassegnata, albumina, α1-gloulina, α2-gloulina, β-gloulina, γ-gloulina.
5) Conservazione: sottoporre a elettroforesi a seccobandanella soluzione detergente per 10-15 minuti, quindi estrarlo e incollarlo su un vetro pulito, dopo che si sarà asciugato diventerà una pellicola trasparentebanda.
SperimentareRisultato
L'effetto di separazione dei campioni di siero è buono e non si verifica alcun fenomeno di "band tailing". La ripetibilità dei risultati varia a seconda delle procedure di test e dei metodi dello sperimentatore e la ripetibilità è elevata.
Conclusione
Il sistema di rilevamento rapido dell'elettroforesi clinica (Serbatoio per elettroforesiDYCP-38C,Alimentazione elettricaDYY-6C e caricamento campione superiore WD-9404) prodotto dal nsazienda Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltdsoddisfa i requisiti sperimentali,Ei risultati sono riproducibili, semplici e veloci, adatti ainsegnamentoricerca.
Pechino LiuyiBiotechnology Co., Ltd è specializzata nella produzione di prodotti di elettroforesi per l'industria delle scienze della vita, cheha più di 50 anni di storia in Cina e l'azienda è in grado di fornire prodotti stabili e di alta qualità in tutto il mondo. Attraverso anni di sviluppo, è degno della tua scelta!
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Orario di pubblicazione: 14 novembre 2022