Preparazione dell'elettroforesi e applicazione del campione su membrana di acetato di cellulosa

Pretrattamento della membrana in acetato di cellulosa

Membrana di taglio:

Tagliare la membrana di acetato di cellulosa in dimensioni specifiche in base alla quantità di campioni separati, in genere 2,5 cm x 11 cm o 7,8 cm x 15 cm.

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Linea di applicazione del campione di marcatura:

  • Sul lato non lucido della membrana segnare leggermente con una matita la linea di applicazione del campione.
  • La posizione della linea di applicazione può essere scelta a 2-3 cm da un'estremità della membrana o talvolta vicino alla linea centrale.
  • La posizione della linea di applicazione viene solitamente determinata sulla base di esperimenti preliminari di elettroforesi.

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Immersione nella soluzione tampone per elettrodi:

  • In un piatto poco profondo o in un piatto di coltura, versare la soluzione tampone dell'elettrodo.
  • Far galleggiare con attenzione la membrana sulla superficie della soluzione tampone dell'elettrodo, assicurandosi che il lato non lucido sia rivolto verso il basso.
  • Man mano che il fondo della membrana assorbe la soluzione tampone dell'elettrodo, affonda gradualmente fino a sommergersi completamente.

Rimozione e assorbimento del liquido in eccesso:

  • Dopo che la membrana ha permeato la soluzione tampone dell'elettrodo, utilizzare una pinza smussata per rimuoverla con attenzione.
  • Inserire la membrana tra due strati di carta da filtro per assorbire la soluzione tampone dell'elettrodo in eccesso, evitando un'eccessiva secchezza.
  • Se sulla membrana appare un'area bianca opaca, che indica un'essiccazione eccessiva, immergere nuovamente la membrana nella soluzione tampone dell'elettrodo e assorbire al grado appropriato con carta da filtro.

Processo di richiesta di esempio

Scelta e funzionamento sulla linea di applicazione del campione:

Applicare il campione lungo la linea di applicazione del campione sul lato non lucido della membrana, solitamente secondo uno schema lineare anziché puntiforme.

Applicazione campione di analisi qualitativa:

  • Utilizzare tubi capillari (con un diametro di 0,5~1,0 mm) o stampi per l'applicazione del campione di analisi qualitativa.
  • Durante l'analisi qualitativa, immergere il campione e “timbrarlo” lungo la linea di applicazione del campione.

Applicazione campione di analisi quantitativa:

  • Utilizzare una siringa da microlitro per l'applicazione del campione di analisi quantitativa.
  • Quando si utilizza un tubo capillare o una siringa da microlitro, spostarlo delicatamente su e giù o a sinistra e a destra lungo la linea di applicazione del campione fino a quando non viene applicato il volume predeterminato del campione.

Controllo delle dimensioni della linea di sezione:

  • Dopo aver applicato ciascun campione sulla membrana, la lunghezza della linea di campionamento è generalmente di 1,5 cm, con una larghezza generalmente non superiore a 4 mm.
  • La distanza tra le linee campione e tra la linea campione e il bordo lungo della membrana è generalmente di 3~5 mm.

Regolazione del volume del campione:

La quantità o il volume del campione applicato varia in modo significativo a seconda di fattori quali la concentrazione del campione, la colorazione e i metodi analitici.

Volume del campione durante l'analisi quantitativa:

Per l'analisi quantitativa, il volume del campione applicato su ciascun centimetro della linea di applicazione del campione è generalmente di 0,1-0,5μl, equivalente alla quantità di un campione di proteine ​​da 5-1000μg.

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Esperimento per la separazione delle proteine ​​sieriche mediante elettroforesi su membrana di acetato di cellulosa

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Orario di pubblicazione: 30 gennaio 2024