L'elettroforesi su gel del DNA è una tecnica comune di biologia molecolare utilizzata per separare e analizzare frammenti di DNA in base alle loro dimensioni.Il processo prevede il caricamento di frammenti di DNA di diverse dimensioni su un gel fatto di agarosio, un carboidrato presente nelle alghe rosse.
Preparazione e colata del gel di agarosio
- Sciogliere l'agarosio in una quantità adeguata di tampone di elettroforesi.La concentrazione del gel è determinata dal rapporto massa/volume, ad esempio 1 g di agarosio su 100ml di tampone per un gel all'1%.
- Riscaldare la miscela nel microonde, ruotando il contenitore per garantire la completa dissoluzione dell'agarosio.
- Aggiungere bromuro di etidio alla soluzione gel fino ad una concentrazione finale di 0,5mg/ ml.Il bromuro di etidio si intercala tra le coppie di basi del DNA adiacenti ed emette fluorescenza arancione sotto la luce UV.Tieni presente che il bromuro di etidio è cancerogeno, quindi maneggiarlo richiede misure di sicurezza adeguate, come indossare guanti.
- Raffreddare la soluzione di gel a bagnomaria per evitare che il vassoio del gel si deformi a causa delle alte temperature.
- Posizionare un pettine nella soluzione gel per formare i pozzetti del campione.Seleziona pettini adatti alla quantità di campione di DNA che caricherai.Versare la soluzione di gel di agarosio nelvassoio del gele lasciarlo solidificare a temperatura ambiente.
- Una volta che il gel si sarà solidificato, rimuovere il pettine.Se non utilizzerai il gel immediatamente, avvolgilo nella pellicola trasparente e conservalo a 4°C fino al momento dell'uso.
Preparazione ed esecuzione del gel
Prima di iniziare l'elettroforesi, mescolare il campione di DNA con il tampone di caricamento.Il buffer di caricamento è solitamente sei volte più concentrato e aiuta il campione ad affondare sul fondo dei pozzetti e a seguirne il movimento durante l'elettroforesi.
Impostare l'alimentatore sulla tensione specificata.
Aggiungere abbastanza tampone per elettroforesi al serbatoio del gel per coprire la superficie del gel.Garantirei collegamenti corretti degli elettrodi.
Caricare il campione di DNA e i marcatori di peso molecolare nei pozzetti del gel.
Accendere l'alimentazione per avviare l'elettroforesi.
Osservazione di frammenti di DNA separati
Dopo l'elettroforesi, spegnere l'alimentazione e rimuovere il gel.
Utilizzare una fonte di luce UV per illuminare il gel;I frammenti di DNA appariranno come bande fluorescenti arancioni.
Documentare l'immagine del gel per analizzare i frammenti di DNA separati.
Dopo l'esperimento, garantire il corretto smaltimento del gel e del tampone dell'elettroforesi, seguendo le linee guida del laboratorio.Indossare sempre i guanti quando si maneggiano gel e tamponi contenenti bromuro di etidio per proteggersi dall'esposizione a questa sostanza pericolosa.
L'elettroforesi su gel del DNA è ampiamente utilizzata nella biologia molecolare e nella ricerca genetica per stimare le dimensioni delle molecole di DNA, separare frammenti di DNA, rilevare mutazioni genetiche e impronte digitali del DNA, tra le altre applicazioni.È una tecnica sperimentale semplice ed efficace che aiuta a comprendere la composizione e le caratteristiche dei campioni di DNA.
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Orario di pubblicazione: 08 agosto 2023