La reazione a catena della polimerasi (PCR) è una tecnica di biologia molecolare utilizzata per amplificare specifici frammenti di DNA. Può essere considerata una forma speciale di replicazione del DNA al di fuori di un organismo vivente. La caratteristica principale della PCR è la sua capacità di aumentare significativamente le tracce di DNA.
Panoramica di un ciclo di reazione a catena della polimerasi
Immagine da Bioninja
Qual è il processo di ciclo termico nella PCR?
La PCR consiste di tre passaggi fondamentali:
1. Denaturazione del DNA modello: il DNA modello viene riscaldato a circa 93°C per una certa durata, provocando la separazione del DNA a doppio filamento in filamenti singoli, preparandolo per il legame con il primer nel ciclo di reazione successivo.
2. Ricottura del DNA modello e dei primer: dopo la denaturazione, la temperatura viene abbassata a circa 55°C, consentendo ai primer di legarsi alle sequenze complementari sul DNA modello a filamento singolo.
3. Estensione dei primer: a 72°C, il complesso modello-primer del DNA subisce un'estensione con l'aiuto della DNA polimerasi (come la Taq DNA polimerasi), utilizzando i dNTP come substrati per sintetizzare un nuovo filamento complementare basato sul DNA modello.
Ripetendo i processi di denaturazione, ricottura ed estensione, vengono generati più “filamenti di replica semi-conservativi”, che possono servire da modelli per i cicli successivi. Ogni ciclo dura circa 2-4 minuti, consentendo al gene bersaglio di essere amplificato milioni di volte in 2-3 ore.
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Orario di pubblicazione: 24 settembre 2024