Elettroforesi su gel di poliacrilammide
L'elettroforesi su gel è una tecnica fondamentale nei laboratori di tutte le discipline biologiche, poiché consente la separazione di macromolecole come DNA, RNA e proteine. Diversi mezzi e meccanismi di separazione consentono di separare più efficacemente sottoinsiemi di queste molecole sfruttando le loro caratteristiche fisiche. Per le proteine in particolare, l'elettroforesi su gel di poliacrilammide (PAGE) è spesso la tecnica di scelta.
PAGE è una tecnica che separa macromolecole come le proteine in base alla loro mobilità elettroforetica, cioè la capacità degli analiti di muoversi verso un elettrodo di carica opposta. In PAGE, questo è determinato dalla carica, dalla dimensione (peso molecolare) e dalla forma della molecola. Gli analiti si muovono attraverso i pori formati nel gel di poliacrilammide. A differenza del DNA e dell'RNA, le proteine variano in carica a seconda degli amminoacidi incorporati, il che può influenzarne il funzionamento. Le stringhe di amminoacidi possono anche formare strutture secondarie che influiscono sulla loro dimensione apparente e di conseguenza sul modo in cui sono in grado di muoversi attraverso i pori. Potrebbe quindi talvolta essere desiderabile denaturare le proteine prima dell'elettroforesi per linearizzarle se è necessaria una stima più accurata delle dimensioni.
PAGINA SDS
L'elettroforesi su gel di poliacrilammide con sodio e dodecil solfato è una tecnica utilizzata per separare molecole proteiche di massa compresa tra 5 e 250 kDa. Le proteine vengono separate esclusivamente in base al loro peso molecolare. Nella preparazione dei gel viene aggiunto sodio dodecil solfato, un tensioattivo anionico, che maschera le cariche intrinseche dei campioni proteici e conferisce loro un rapporto carica/massa simile. In parole semplici, denatura le proteine e conferisce loro una carica negativa.
PAGINA nativa
La PAGE nativa è una tecnica che utilizza gel non denaturati per la separazione delle proteine. A differenza di SDS PAGE, nella preparazione dei gel non viene aggiunto alcun agente denaturante. Di conseguenza, la separazione delle proteine avviene in base alla carica e alle dimensioni delle proteine. In questa tecnica, la conformazione, il ripiegamento e le catene di amminoacidi delle proteine sono i fattori da cui dipende la separazione. Le proteine non vengono danneggiate durante questo processo e possono essere recuperate dopo il completamento della separazione.
Come funziona l'elettroforesi su gel di poliacrilammide (PAGE)?
Il principio di base di PAGE è quello di separare gli analiti facendoli passare attraverso i pori di un gel di poliacrilammide utilizzando una corrente elettrica. Per ottenere ciò, una miscela acrilammide-bisacrilammide viene polimerizzata (poliacrilammide) mediante l'aggiunta di persolfato di ammonio (APS). La reazione, catalizzata dalla tetrametiletilendiammina (TEMED), forma una struttura a rete con pori attraverso i quali gli analiti possono muoversi (Figura 2). Maggiore è la percentuale di acrilammide totale inclusa nel gel, minore sarà la dimensione dei pori e quindi minori saranno le proteine che potranno attraversarlo. Anche il rapporto tra acrilammide e bisacrilammide avrà un impatto sulla dimensione dei pori, ma questo viene spesso mantenuto costante. Le dimensioni più piccole dei pori riducono anche la velocità con cui le piccole proteine sono in grado di muoversi attraverso il gel, migliorando la loro risoluzione e impedendo loro di fuoriuscire rapidamente nel tampone quando viene applicata la corrente.
Attrezzatura per elettroforesi su gel di poliacrilammide
Cella per elettroforesi su gel (serbatoio/camera)
Il serbatoio del gel per l'elettroforesi su gel di poliacrilammide (PAGE) è diverso dal serbatoio del gel di agarosio. Il serbatoio del gel di agarosio è orizzontale, mentre il serbatoio PAGE è verticale. Nella cella di elettroforesi verticale (serbatoio/camera), un gel sottile (normalmente 1,0 mm o 1,5 mm) viene versato tra due lastre di vetro e montato in modo che la parte inferiore del gel sia immersa nel tampone in una camera e la parte superiore sia immersa nel tampone in un'altra camera. Quando viene applicata la corrente, una piccola quantità di tampone migra attraverso il gel dalla camera superiore a quella inferiore. Con robusti morsetti per garantire che il gruppo rimanga in posizione verticale, l'apparecchiatura facilita il passaggio rapido del gel con un raffreddamento uniforme che dà luogo a bande distinte.
Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd. (Liuyi Biotechnology) produce celle per elettroforesi su gel di poliacrilammide di varie dimensioni (serbatoi/camere). I modelli DYCZ-20C e DYCZ-20G sono celle di elettroforesi verticale (serbatoi/camere) per l'analisi del sequenziamento del DNA. Alcune celle di elettroforesi verticale (serbatoi/camere) sono compatibili con il sistema blotting, come il modello DYCZ-24DN, DYCZ-25D e DYCZ-25E sono compatibili con il sistema Western Blotting modello DYCZ-40D, DYCZ-40G e DYCZ-40F, che vengono utilizzati per trasferire la molecola proteica dal gel alla membrana. Dopo l'elettroforesi SDS-PAGE, il Western Blotting è una tecnica per rilevare una proteina specifica in una miscela proteica. È possibile scegliere questi sistemi blotting in base ai requisiti sperimentali.
Alimentatore per elettroforesi
Per fornire l'elettricità necessaria per far funzionare il gel, avrai bisogno di un alimentatore per elettroforesi. Presso Liuyi Biotechnology forniamo una gamma di alimentatori per elettroforesi per tutte le applicazioni. I modelli DYY-12 e DYY-12C con tensione e corrente altamente stabili possono soddisfare i requisiti di elettroforesi ad alta tensione. Ha la funzione di supporto, cronometraggio, VH e applicazione passo-passo. Sono ideali per applicazioni di elettroforesi IEF e sequenziamento del DNA. Per applicazioni generali di elettroforesi su proteine e DNA, abbiamo il modello DYY-2C, DYY-6C, DYY-10 e così via, che sono anche alimentatori di vendita calda con celle di elettroforesi (serbatoi/camere). Questi possono essere utilizzati per applicazioni di elettroforesi a media e bassa tensione, ad esempio nei laboratori scolastici, ospedalieri e così via. Altri modelli di alimentatori, visita il nostro sito web.
Il marchio Liuyi ha più di 50 anni di storia in Cina e l'azienda è in grado di fornire prodotti stabili e di alta qualità in tutto il mondo. Attraverso lo sviluppo di anni, è degno della tua scelta!
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Riferimenti per Cos'è l'elettroforesi su gel di poliacrilammide?
1. Karen Steward PhD Elettroforesi su gel di poliacrilammide, come funziona, varianti tecniche e sue applicazioni
Orario di pubblicazione: 23 maggio 2022