Hai qualche difficoltà nella preparazione del gel di agarosio?Seguiamoil nostro tecnico di laboratorio nella preparazione del gel.
Il processo di preparazione del gel di agarosio prevede i seguenti passaggi:
Pesatura della polvere di agarosio
Pesare la quantità richiesta di polvere di agarosio in base alla concentrazione desiderata per l'esperimento. Le concentrazioni comuni di agarosio variano dallo 0,5% al 3%. Concentrazioni più elevate vengono utilizzate per separare molecole di DNA più piccole, mentre concentrazioni più basse sono per molecole più grandi.
Preparazione della soluzione tampone
Aggiungere la polvere di agarosio a un tampone di elettroforesi appropriato, come 1× TAE o 1× TBE. Il volume del tampone deve corrispondere al volume di gel necessario per l'esperimento.
Sciogliere l'agarosio
Riscaldare la miscela di agarosio e tampone finché l'agarosio non si dissolve completamente. Questo può essere fatto utilizzando un forno a microonde o una piastra calda. Mescolare la soluzione a intermittenza per evitare che trabocchi. La soluzione di agarosio dovrebbe diventare limpida senza particelle visibili.
Raffreddamento della soluzione di agarosio
Lasciare raffreddare la soluzione di agarosio riscaldata a circa 50-60°C. Mescolare la soluzione durante il processo di raffreddamento per evitare una solidificazione prematura.
Aggiunta del colorante per acido nucleico (facoltativo)
Se vuoi visualizzare il DNA o l'RNA nel gel, in questa fase puoi aggiungere un colorante per acido nucleico, come GelRed o bromuro di etidio. Quando maneggi queste macchie, indossa i guanti e fai attenzione, poiché possono essere tossiche.
Colata del Gel
Versare la soluzione di agarosio raffreddata in uno stampo di gel per elettroforesi preparato. Inserire un pettine per creare pozzetti per il campione, assicurandosi che il pettine sia sicuro e che la soluzione sia distribuita uniformemente nello stampo.
Solidificazione del gel
Lasciare solidificare il gel a temperatura ambiente, operazione che in genere richiede 20-30 minuti a seconda della concentrazione e dello spessore del gel.
Rrimuovendo il pettine
Una volta che il gel si è completamente solidificato, rimuovere con attenzione il pettine per rivelare i pozzetti del campione. Posizionare il gel insieme allo stampo nella camera di elettroforesi e coprirlo con la quantità adeguata di tampone di elettroforesi, assicurandosi che il gel sia completamente sommerso.
Preparazione per l'elettroforesi
Dopo che il gel è pronto, carica i campioni nei pozzetti e procedi con l'esperimento di elettroforesi.
Se hai problemi con la preparazione del gel, non esitare a contattarci. Abbiamo tecnici di laboratorio professionisti disponibili per comunicare con te.
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Orario di pubblicazione: 15 ottobre 2024