Introduzione
L'elettroforesi su gel è una tecnica fondamentale nella biologia molecolare, ampiamente utilizzata per la separazione di proteine, acidi nucleici e altre macromolecole. Il controllo adeguato del volume del campione, della tensione e del tempo dell'elettroforesi è fondamentale per ottenere risultati accurati e riproducibili.Il nostro collega di laboratorio offremigliori pratiche per la gestione di questi parametri durante l'elettroforesi su gel SDS-PAGE.
Prodotti per elettroforesi su gel di Pechino Liuyi Biotechnology
Volume del campione: garantire la coerenza
Quando si esegue l'elettroforesi SDS-PAGE, il volume del campione è un fattore chiave che può avere un impatto significativo sulla risoluzione dei risultati. In genere si consiglia di caricare 10 µl di proteine totali per pozzetto. Per garantire la coerenza e prevenire la diffusione del campione tra pozzetti adiacenti, è importante caricare un volume uguale di tampone di caricamento 1x in tutti i pozzetti vuoti. Questa precauzione aiuta a prevenire la diffusione dei campioni nelle corsie vicine, che può verificarsi se il pozzetto viene lasciato vuoto.
Prima di caricare i campioni, iniziare sempre aggiungendo un marcatore di peso molecolare in un pozzetto. Ciò consente una facile identificazione delle dimensioni delle proteine dopo l'elettroforesi.
Controllo della tensione: bilanciamento di velocità e risoluzione
La tensione applicata durante l'elettroforesi influisce direttamente sia sulla velocità con cui i campioni migrano attraverso il gel sia sulla risoluzione della separazione. Per SDS-PAGE è consigliabile iniziare con una bassa tensione di circa 80 V. Questa bassa tensione iniziale consente ai campioni di migrare lentamente e in modo uniforme, concentrandoli in una banda netta quando entrano nel gel di separazione.
Una volta che i campioni sono completamente entrati nel gel di separazione, la tensione può essere aumentata a 120 V. Questa tensione più elevata accelera la migrazione, garantendo che le proteine vengano separate in modo efficiente in base al loro peso molecolare. È essenziale monitorare l'andamento del fronte colorante del blu di bromofenolo, che indica il completamento dell'elettroforesi. Per i gel con una concentrazione del 10-12%, in genere sono sufficienti 80-90 minuti; tuttavia, per i gel al 15%, potrebbe essere necessario prolungare leggermente il tempo di esecuzione.
Gestione del tempo: sapere quando fermarsi
Il tempismo è un altro fattore critico nell'elettroforesi su gel. L'utilizzo del gel per un periodo troppo lungo o troppo breve può portare a una separazione non ottimale. La migrazione del colorante blu di bromofenolo è un utile indicatore: quando raggiunge il fondo del gel, solitamente è il momento di interrompere la corsa. Per i gel standard, ad esempio al 10-12%, è generalmente adeguata una durata dell'elettroforesi di circa 80-90 minuti. Per i gel con una percentuale più elevata, come il 15%, il tempo di esecuzione deve essere prolungato per garantire la completa separazione delle proteine.
Gestione dei buffer: riutilizzo e preparazione dei buffer
Il tampone per elettroforesi può essere riutilizzato 1-2 volte, a seconda delle condizioni specifiche del laboratorio. Tuttavia, per ottenere risultati ottimali, si consiglia di preparare un nuovo tampone 10x e di diluirlo appena prima dell'uso. Ciò garantisce che il tampone mantenga la sua efficacia, garantendo risultati dell'elettroforesi più affidabili.
Prodotti per elettroforesi su gel di Pechino Liuyi Biotechnology
Controllando attentamente il volume del campione, la tensione e la durata dell'elettroforesi, è possibile migliorare significativamente la precisione e la riproducibilità dei risultati dell'elettroforesi su gel. L'implementazione di queste migliori pratiche nel tuo lavoro di laboratorio ti aiuterà a ottenere bande più chiare e distinte, portando a dati migliori per l'analisi a valle.
Se disponi di altri metodi validi per ottimizzare l'esperimento di elettroforesi su gel, non esitare a discuterne con noi!
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) è specializzata nella produzione di strumenti per elettroforesi da oltre 50 anni con il nostro team tecnico professionale e un centro di ricerca e sviluppo. Disponiamo di una linea di produzione affidabile e completa dalla progettazione all'ispezione, al magazzino, nonché al supporto di marketing. I nostri prodotti principali sono cella per elettroforesi (serbatoio/camera), alimentatore per elettroforesi, transilluminatore LED blu, transilluminatore UV, sistema di analisi e immagine gel ecc. Forniamo anche strumenti da laboratorio come strumento PCR, miscelatore vortex e centrifuga per laboratorio.
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Orario di pubblicazione: 20 agosto 2024